一、 儀器介（jiè）紹

實驗（yàn）目的：

本試驗用於檢測（cè）受試物對體外培養的哺（bǔ）乳動物細（xì）胞的基因突變（biàn）作用,包括堿基（jī）對突變、移碼突變和缺失等,從而評（píng）價受試（shì）物引起突變的可能性

實驗概述：

本試驗屬正向突變試驗,可檢出堿基置換型（xíng）致突變物和移碼型致突變物。在（zài）加入（rù）和不加入代謝活化係統的條件下,使細（xì）胞（bāo）暴露於受試物一定時間,然後將細胞傳（chuán）代培養。胸苷激酶水平正常的細胞對三氟胸苷（trifluorothymidine,TFT）等敏感,因（yīn）而在培養液中不能生長分裂,突變細胞則不敏感,在含有（yǒu）三氟胸苷（gān）的（de）選擇性培養液中能（néng）繼續分裂並形成集（jí）落。相似的（de）,次黃嘌呤（lìng）鳥嘌（piào）呤磷酸核糖基酶(HPRT)正常的細胞對 6-硫代鳥（niǎo）嘌呤（6-thioguanine,6-TG）敏感,突變的細胞則不敏感,在含有 6-硫代鳥嘌呤的選擇性培養液中可生（shēng）長形成集落。基於突變集（jí）落數,計算突變頻率以評價受試物的致突變性。

應用（yòng）範圍

應用於科研、農（nóng）業、衛生、教育、霧霾狀（zhuàng）態可吸入顆粒染毒效（xiào）果研究等各個領域

符合標準：

GB/T 15670.20-2017《農藥（yào）登記（jì）毒理學試驗方（fāng）法第20部分:體外哺乳（rǔ）動物細胞基因突變（biàn）試（shì）驗》

二、試驗流程

1）細胞培養:

選擇合適（shì）細胞係（如L5178Y、CHO），常規傳代培養

2）受試物處理:

暴露於不同濃（nóng）度（dù）受（shòu）試物（需設陰（yīn）性/陽性對照）

3）表達期:

預留足夠時間（通常7-10天）使突變表（biǎo）型顯現（xiàn）。

4.）突變體篩（shāi）選:

TK試驗:使用三氟（fú）胸苷（TFT）篩選TK突變體。

HPRT試驗:使（shǐ）用（yòng）6-硫代（dài）鳥嘌呤（6-TG）選HPRT突變體。

5）克隆形成分析:

計數突變集落，計算突變頻率（突變集（jí）落數/存（cún）活細胞（bāo）數）

6）數據統計:

與對照組比較，判斷（duàn）突變（biàn）率是否顯著增加。

三、注意事項

1）細胞活力控製:受試物濃度需保證細胞存活率（通常>50%）

2）代謝活化（huà）係統:需（xū）加入S9混合物(模擬體內（nèi）代謝，（如Aroclor 1254誘導的大鼠肝S9）。

3）假陽性/陰性:避免pH、滲透壓（yā）等非特（tè）異性（xìng）因素幹擾。

4）合規性:   遵循國際指南（如OECD 490、ICH S2R1）。

計算：