一、 儀器介紹（shào）

實驗目的：

本試驗檢（jiǎn）測受試物是否引起培養的哺乳動物細胞染（rǎn）色體畸變,以評價受試物致（zhì）突變的可能（néng）性

實驗概述：

在加入和（hé）不加入代謝活化（huà）係統的條件下,使培養的哺乳動物細（xì）胞暴露於受試物中。用中（zhōng）期分裂相阻斷（duàn）劑（如秋水仙素或秋水仙胺）處理,使（shǐ）細胞停（tíng）止在中期分裂相,隨後收獲細胞,製片,染色,分析染色體畸變。

大部分的致突變劑（jì）導致染（rǎn）色單體型畸變,偶有染色體型畸變發生。雖然多倍（bèi）體（tǐ）的增加可能（néng）預示著有染色體數目畸變的可能,但本方法並（bìng）不適合用於測定染色體的數目畸變。

應用範圍

應用於科（kē）研、農業、衛生、教育、霧霾狀態可吸入顆粒染毒（dú）效果研究等各個領域

符合標準：

GB/T 15670.19-2017《農（nóng）藥登記毒理學試驗方法第19部分:體外哺乳動物細胞染色體

畸變試驗》

二、試（shì）驗（yàn）流程

1）細胞培養

選擇合適細胞係，在含血清培養基中培養至對數生長期。

2）受試物處理

設置多（duō）個濃度組（需包括細胞毒（dú）性評估，如50%生長抑製濃度）

陽性對照（如絲裂黴素C、環磷酰胺等已知誘變劑）

陰性對照（溶劑對照）

3.）代謝活化係統（S9混合（hé）液）

模擬（nǐ）體內代謝，用於檢測（cè）需（xū）代謝激活的致突變物（如加Aroclor 1254誘導的大（dà）鼠肝S9）

4.）采樣時間（jiān）

短期處理（lǐ）:1個細胞周（zhōu）期（qī）（通常24小時，含或不含S9）

長期處理:覆蓋多個細胞周（zhōu）期（如48小時）

5）染色體製備

秋水仙素（sù）（或秋水仙胺）處理:阻斷中期細胞。

低滲處理（KCI溶液）使細胞膨脹。

固定（甲醇:冰醋酸（suān）=3:1）後滴片，Giemsa染（rǎn）色。

6）鏡檢分析

顯微鏡下觀察至少200個中期分（fèn）裂相（xiàng），記錄畸（jī）變類型和頻（pín）率。

三、儀器與試劑

關鍵儀器：

培（péi）養（yǎng）箱、生物安（ān）全櫃、離心機、顯（xiǎn）微鏡（jìng）（配（pèi）備油鏡和圖像（xiàng）分析係統）

染色體自（zì）動掃描儀（可選）

主要試（shì）劑:

細胞培養基、胎（tāi）牛血清、胰（yí）蛋白酶。

秋（qiū）水仙（xiān）素（sù）、Giemsa染液、S9混合液。