一、 儀器介紹

實驗（yàn）目的：

確定重複（fù）接觸受試物對（duì）哺乳動物是否可引起（qǐ）皮膚變態反應及（jí）其程度

試驗概述：  

局部封閉塗皮（pí）試驗（Buehler test，BT）和豚鼠最大值試驗（yàn）（uinea pig maximisation test，GPMT）是（shì）實驗動物通過多次皮膚塗抹（誘導（dǎo）接觸（chù））或（huò）皮內注射受試物10d~14d（誘導階段）後,給予激發劑（jì）量的受試物,觀察實驗（yàn）動物,並與（yǔ）對照（zhào）動物比較對激發接觸（chù）受試物的（de）皮膚反應強度。

小鼠局（jú）部淋巴結分析試驗（locallymph node assay，LLNA）是通過耳部給予實驗動物受試物,引起淋巴結（jié）的淋巴（bā）細胞增生,淋巴細胞增生與受試物劑量（過敏程度）成比例。利（lì）用放射性標記（jì）方法,測定試驗組與對（duì）照組淋巴細胞的標記率（lǜ）,並（bìng）進（jìn）行對比,獲（huò）得刺激指數,評價致敏強度。

應用範圍

應用於（yú）科研、農業、衛生（shēng）、教育、霧霾狀態可吸入顆粒染毒效果研究等各個領域

符合標準：

GB/T 15670.9-2017《農藥登記毒理學（xué）試驗方法第9部分皮膚變態（tài）反應（致敏）試驗》

二（èr）、試（shì）驗步驟:

1. Buehler Test（BT） 

動物模型:豚鼠

操作（zuò）步驟:

誘導階段:通過封閉式皮膚塗抹受試物，持續（xù）10-14天。激（jī）發階段:間隔（gé）後再次塗抹受（shòu）試物，觀察皮膚反（fǎn）應。

觀察指標:紅斑、水腫等皮膚炎症反應的強度(主觀評分)

優點:

模（mó）擬（nǐ）人類皮膚接觸途徑，適用於局部製（zhì）劑(如化妝品、外用藥物)

無需注射，操作相對溫和。0

缺點（diǎn）:

敏感性較低，可能漏檢弱致敏物，。依賴主觀評分，存在實驗者偏差。0應用場景:傳（chuán）統化（huà）妝品、外用藥品的安全性評估。

2.豚鼠最大值試驗（GPMT）

動物模型:豚鼠

操作步驟:

誘（yòu）導階段:皮內（nèi）注射受試物（wù）（常聯合弗氏完全佐劑）結合皮膚塗抹，持續10-14天。

激發階段:再次塗抹受試物，評估皮（pí）膚（fū）反應。

觀察（chá）指（zhǐ）標（biāo）:與BT類似，但反應更強烈(紅斑、水腫、硬結)

優點:

敏感性（xìng）高，可檢測強致敏物和（hé）弱致敏物（wù）;

國際公認的“金標準（zhǔn）”，尤其適用於化學品和（hé）工業原料。

缺點:

使（shǐ）用佐劑可能引發（fā）過度免疫反應，導致假陽性;

動物痛苦程度較（jiào）高，倫理爭議較大。

應用（yòng）場景:工業化學品（pǐn）、強致（zhì）敏性物質(如染發劑、橡（xiàng）膠添加劑)的嚴格檢（jiǎn）測（cè）。

3.小鼠局部淋巴結試驗（LLNA）

動物模型:小鼠.

操作步驟:

誘導階段:連（lián）續3天耳（ěr）部塗抹受試物（wù）。

檢測指標:通過3H-胸苷或BrdU標記增殖的淋巴細胞，計算刺激指數（SI）觀察指標:淋巴結淋巴細胞增殖程度（SI>3判為陽性）

優點:

客觀定量:減少主觀評分誤差；

符合3R原則:動物用量少，無需（xū）激發階段（duàn），痛苦小;

高效快速:試驗周期短(約1周（zhōu）)。

缺點:

對某些物質(如（rú）金屬鹽)敏感性（xìng）不足，需使用放射性物（wù）質或特殊設備，成本較高。

應用場景:歐盟等（děng）法規優先推薦的替代方法，廣（guǎng）泛用於藥品、化妝品及化工產品的初篩。